Venen koulèv gen anzim ki idrolize lyezon ester karboksil.Substra yo pou idroliz yo se fosfolipid, asetilkolin ak acetate aromat.Anzim sa yo gen twa kalite: fosfolipaz, asetilkolinesteraz ak aromat esteraz.Arginine esteraz nan venen koulèv kapab tou idrolize arjinin sentetik oswa lizin, men li sitou idrolize lyezon peptide pwoteyin nan lanati, kidonk li fè pati proteaz.Anzim yo diskite isit la sèlman aji sou substra ester epi yo pa ka aji sou okenn kosyon peptide.Pami anzim sa yo, fonksyon byolojik asetilkolinesteraz ak fosfolipaz yo pi enpòtan epi yo te etidye konplètman.Gen kèk venen koulèv ki gen gwo aktivite aromat esteraz, ki ka idrolize p-nitrophenyl ethyl ester, yon - oswa P-naphthalene acetate ak endol ethyl ester.Li toujou enkoni si aktivite sa a pwodui pa yon anzim endepandan oswa yon efè segondè li te ye nan carboxylesterase, se pou kont li siyifikasyon byolojik li yo.Lè venen Agkistrodon halys Japonicus te reyaji ak p-nitrophenyl ethyl ester ak endol ethyl ester, idrolysates yo nan p-nitrophenol ak indol phenol pa te jwenn;Okontrè, si sa yo ester reyaji ak cobra Zhoushan sou-espès koulèv venen ak Bungarus multicinctus koulèv venen, yo pral byen vit idrolize.Li konnen ke venen cobra sa yo gen gwo aktivite cholinesterase, ki ka responsab pou idroliz substrats ki anwo yo.An reyalite, Mclean et al.(1971) rapòte ke anpil venen koulèv ki fè pati fanmi Cobra ka idrolize endol etil ester, naftalèn etil ester ak butyl naftalèn ester.Venn koulèv sa yo soti nan: kobra, kobra kou nwa, kobra a lèv nwa, kobra an lò, kobra moun peyi Lejip yo, kobra wa a, kobra an lò mamba, mamba nwa ak mamba a lèv blan (D. aw toujou konnen rhombola lès).
Venn koulèv la ka idrolize methyl indole etil ester, ki se substrate pou detèmine aktivite cholinesterase nan serom, men venen koulèv sa a pa montre aktivite cholinesterase.Sa a montre ke gen yon esteraz enkoni nan venen cobra, ki diferan de kolinesteraz.Pou konprann nati anzim sa a, plis travay separasyon nesesè.
1、 Fosfolipas A2
(I) Apèsi sou lekòl la
Fosfolipas se yon anzim ki ka idrolize fosfat gliseril.Gen 5 kalite fosfolipaz nan lanati, sètadi fosfolipaz A2 ak fosfolipaz.
A. , fosfolipaz B, fosfolipaz C ak fosfolipaz D. Venen koulèv la sitou gen fosfolipaz A2 (PLA2), kèk venen koulèv gen fosfolipaz B, ak lòt fosfolipas yo sitou jwenn nan tisi bèt ak bakteri.Fig. 3-11-4 montre sit aksyon fosfolipas sa yo sou idroliz substra.
Pami fosfolipas, PLA2 te etidye plis.Li ka anzim ki pi etidye nan venen koulèv.Substra li se kosyon ester sou dezyèm pozisyon Sn-3-glycerophosphate.Se anzim sa a lajman jwenn nan venen koulèv, venen myèl, venen eskòpyon ak tisi bèt, ak PLA2 abondan nan kat venen koulèv fanmi.Paske anzim sa a kraze globil wouj nan san ak lakòz emoliz, yo rele li tou "emolysin".Gen kèk moun ki rele tou lezitinaz emolitik PLA2.
Ludeeke premye te jwenn ke venen koulèv ka pwodui yon konpoze emolitik lè li aji sou lesitin atravè anzim.Apre sa, Delezenne et al.te pwouve ke lè venen cobra aji sou serom chwal oswa jònze, li fòme yon sibstans emolitik.Li konnen kounye a ke PLA2 ka dirèkteman aji sou fosfolipid yo nan manbràn eritrosit la, detwi estrikti a nan manbràn eritrosit la ak sa ki lakòz emoliz dirèk;Li kapab tou aji sou serom oswa ajoute lesitin pou pwodwi lesitin emolitik, ki aji sou globil wouj yo pou pwodui emoliz endirèk.Malgre ke PLA2 abondan nan kat fanmi yo nan venen koulèv, kontni an nan anzim nan divès kalite venen koulèv se yon ti kras diferan.Koulèv sontal (C
Venn koulèv sèlman te montre fèb aktivite PLA2.Tablo 3-11-11 montre konparezon aktivite PLA2 nan 10 pi gwo venen nan koulèv venen nan peyi Lachin.
Tablo 3-11-11 Konparezon aktivite fosfolipas VIII nan 10 venen koulèv nan peyi Lachin
Venn koulèv
Lage grès
asid alifatik,
Cjumol/mg)
Aktivite emolitik CHU50/^ g * ml)
Venn koulèv
Lage asid gra
(^raol/mg)
Aktivite emolitik "(HU50/ftg * 1111)
Najanaja atra
9. 62
onz
Micracephal ophis
senk pwen youn zewo
kalyspallas
8. 68
de mil uitsan
gracilis
V, akti
7. 56
* * #
Ophiophagus Hannah
twa pwen uit de
san karant
Bnugarus fasctatus
7,56
desan katreven
B. multicinctus
yon pwen nèf sis
desan katreven
Viper ak russelli
sèt pwen zewo twa
T, mucrosquamatos
yon pwen uit senk
Siamensis
T. stejnegeri
0. 97
（2） Separasyon ak pirifikasyon
Kontni PLA2 nan venen koulèv se gwo, epi li estab nan chalè, asid, alkali ak denaturant, se konsa ke li fasil pou pirifye ak separe PLA2.Metòd komen an se premye fè filtraj jèl sou venen brit la, Lè sa a, pote soti nan kwomatografi echanj ion, epi pwochen etap la ka repete.Li ta dwe remake ke friz-seche nan PLA2 apre kwomatografi ion-echanj pa ta dwe lakòz agrégation, paske pwosesis la friz-seche souvan ogmante fòs iyonik nan sistèm nan, ki se yon faktè enpòtan ki lakòz agrégation nan PLA2.Anplis de metòd jeneral ki anwo yo, yo te adopte metòd sa yo tou: ① Wells et al.② Yo te itilize analogue substrate PLA2 kòm ligand pou chromatografi afinite.Ligand sa a ka mare nan PLA2 nan venen koulèv ak Ca2 +.EDTA se sitou itilize kòm eluyan.Apre yo fin retire Ca2 +, afinite ant PLA2 ak ligand diminye, epi li ka separe de ligand.Gen lòt ki sèvi ak 30% solisyon òganik oswa 6mol / L ure kòm eluyan.③ Yo te fè chromatografi idrofob ak PheiiylSephar0SeCL-4B pou retire tras PLA2 nan cardiotoxin.④ Antikò anti PLA2 yo te itilize kòm ligand pou fè chromatografi afinite sou PLA2.
Jiskaprezan, yo te pirifye yon gwo kantite PLAZ venen koulèv.Tu et al.(1977) ki nan lis PLA2 pirifye soti nan venen koulèv anvan 1975. Nan dènye ane yo, yon gwo kantite atik sou separasyon ak pirifikasyon nan PLA2 yo te rapòte chak ane.Isit la, nou konsantre sou separasyon an ak pirifikasyon nan PLA pa entelektyèl Chinwa.
Chen Yuancong et al.(1981) separe twa espès PLA2 soti nan venen Agkistrodon halys Pallas nan Zhejiang, ki ka divize an PLA2 asid, net ak alkalin dapre pwen izoelektrik yo.Dapre toksisite li yo, net PLA2 se pi toksik, ki te idantifye kòm neurotoxin presinaptik Agkistrodotoxin.PLA2 alkalin se mwens toksik, ak PLA2 asid pa gen prèske pa gen okenn toksisite.Wu Xiangfu et al.(1984) konpare karakteristik twa PLA2, ki gen ladan pwa molekilè, konpozisyon asid amine, N-tèminal, pwen izoelektrik, estabilite tèmik, aktivite anzim, toksisite ak aktivite emolitik.Rezilta yo te montre ke yo te gen menm pwa molekilè ak estabilite tèmik, men yo te gen diferans enpòtan nan lòt aspè yo.Nan aspè nan aktivite anzim, aktivite anzim asid te pi wo pase aktivite anzim alkalin;Efè emolitik nan anzim alkalin sou globil wouj nan rat te pi fò a, ki te swiv pa anzim net, ak anzim asid diman emolize.Se poutèt sa, li espekile ke efè a emolitik nan PLAZ gen rapò ak chaj la nan molekil PLA2.Zhang Jingkang et al.(1981) te fè kristal Agkistrodotoxin.Tu Guangliang et al.(1983) te rapòte ke yon PLA toksik ak yon pwen izoelektrik 7. 6 te izole ak pirifye soti nan venen nan Vipera rotundus soti nan Fujian, ak pwopriyete fizik ak chimik li yo, konpozisyon asid amine ak sekans nan 22 résidus asid amine nan N la. -tèminal yo te detèmine.Li Yuesheng et al.(1985) izole epi pirifye yon lòt PLA2 ki soti nan venen Viper rotundus nan Fujian.Sou-inite PLA2 * la se 13 800, pwen izoelektrik la se 10.4, ak aktivite espesifik la se 35/xnioI/miri mg。 Avèk lezitin kòm substra a, pH optimal anzim la se 8.0 ak tanperati optimal se 65 ° C. LD5 enjekte nan venn nan sourit.Li se 0.5 ± 0.12mg / kg.Anzim sa a gen efè antikoagulan ak emolitik evidan.Molekil PLA2 toksik la konsiste de 123 résidus nan 18 kalite asid amine.Molekil la rich nan sistein (14), asid aspartik (14) ak glisin (12), men sèlman gen yon sèl methionine, ak N-tèminal li se rezidi serin.Konpare ak PLA2 izole pa Tuguang, pwa molekilè a ak kantite résidus asid amine nan de izoanzim yo sanble anpil, ak konpozisyon asid amine tou sanble anpil, men kantite asid aspartik ak rezidi prolin se yon ti jan diferan.Guangxi wa cobra venen koulèv gen PLA2 rich.Shu Yuyan et al.(1989) izole yon PLA2 soti nan venen nan, ki gen yon aktivite espesifik 3.6 fwa pi wo pase venen orijinal la, yon pwa molekilè nan 13000, yon konpozisyon nan 122 résidus asid amine, yon pwen izoelektrik nan 8.9, ak bon estabilite tèmik.Soti nan obsèvasyon mikwoskòp elèktron efè PLA2 debaz sou globil wouj yo, li ka wè ke li gen efè evidan sou manbràn globil wouj imen, men li pa gen okenn efè evidan sou globil wouj kabrit.PLA2 sa a gen efè reta evidan sou vitès elektwoforetik globil wouj nan imen, kabrit, lapen ak kochon Gine.Chen et al.Anzim sa a ka anpeche aggregasyon plakèt pwovoke pa ADP, kolagen an ak asid arachidonik sodyòm.Lè konsantrasyon PLA2 se 10/xg/ml ~ lOOjug/ml, agrégation plakèt konplètman anpeche.Si plakèt lave yo te itilize kòm materyèl, PLA2 pa t 'kapab anpeche agrégation nan konsantrasyon nan 20Mg / ml.Aspirin se yon inibitè nan cyclooxygenase, ki ka anpeche efè PLA2 sou plakèt.PLA2 ka anpeche agrégation plakèt lè li idrolize asid arachidonik pou fè sentèz tronboksan A2.Konfòmasyon solisyon PLA2 ki te pwodwi pa Agkistrodon halys Pallas venen nan pwovens Zhejiang te etidye pa mwayen dichroism sikilè, fluoresans ak absòpsyon UV.Rezilta eksperimantal yo te montre ke konfòmasyon chèn prensipal la nan anzim sa a te sanble ak sa yo ki nan menm kalite anzim ki soti nan lòt espès ak jenera, konfòmasyon an kilè eskèlèt te gen bon rezistans chalè, ak chanjman estriktirèl nan anviwònman asid te revèsib.Konbinezon activateur Ca2 + ak anzim pa afekte anviwònman résidus triptofan, pandan inibitè Zn2 + fè opoze a.Fason ki valè pH solisyon an afekte aktivite anzim yo diferan de reyaktif ki anwo yo.
Nan pwosesis pou pirifye PLA2 venen koulèv, yon fenomèn evidan se ke yon venen koulèv gen de oswa plis PLA2 pik elisyon.Fenomèn sa a ka eksplike jan sa a: ① akòz egzistans la nan izozim;② Yon kalite PLA2 polymerize nan yon varyete melanj PLA2 ak divès kalite pwa molekilè, pi fò nan yo se nan seri a nan 9 000 ~ 40 000;③ Konbinezon PLA2 ak lòt konpozan venen koulèv konplike PLA2;④ Paske kosyon amid nan PLA2 idrolize, chaj la chanje.① Ak ② yo komen, ak sèlman kèk eksepsyon, tankou PLA2 nan venen koulèv CrWa/w.
Gen de sitiyasyon: ① ak ②.Yo te jwenn twazyèm kondisyon an nan PLA2 nan venen koulèv sa yo: Oxyranus scutellatus, Parademansia microlepidota, Bothrops a ^> er, sèpan palestinyen, sèpan sab, ak koulèv a sonalè terib km.
Rezilta ka ④ fè vitès migrasyon PLA2 chanje pandan elektwoforèz, men konpozisyon asid amine pa chanje.Peptides yo ka kase pa idroliz, men jeneralman yo toujou mare ansanm pa lyezon disulfid.Venen nan rattlesnake twou lès la gen de fòm PLA2, ki rele tip a ak tip p PLA2 respektivman.Diferans ki genyen ant de kalite PLA2 sa yo se sèlman yon sèl asid amine, se sa ki, glutamin nan yon molekil PLA2 ranplase pa asid glutamik nan lòt molekil PLA2 la.Malgre ke rezon egzak diferans sa a pa klè, li jeneralman kwè ke li gen rapò ak deaminasyon PLA2.Si PLA2 nan venen viper Palestinyen an kenbe cho ak venen brit la, gwoup fen yo nan molekil anzim li yo ap vin pi plis pase anvan.Soti nan C PLA2 izole nan venen koulèv gen de diferan N-tèminal, ak pwa molekilè li yo se 30000. Fenomèn sa a ka koze pa dimè asimetri PLA2, ki sanble ak dimè simetrik ki te fòme pa PLA2 nan venen nan lès diamondback rattlesnake. ak rattlesnake lwès Diamondback.Kobra Azyatik la konpoze de anpil sousespès, kèk nan yo ki pa trè defini nan klasifikasyon.Pou egzanp, sa ki te konn rele Cobra Outer Caspian sou-espès kounye a rekonèt
Li ta dwe atribiye a Outer Caspian Sea Cobra.Kòm gen anpil subspecies epi yo melanje ansanm, konpozisyon an nan venen koulèv varye anpil akòz diferan sous, ak kontni an nan PLA2 isozymes tou wo.Pou egzanp, venen kobra
Yo te jwenn omwen 9 kalite izozim PLA2 nan espès r ^ ll, epi yo te jwenn 7 kalite izozim PLA2 nan venen sou-espès cobra Caspian.Durkin et al.(1981) etidye kontni PLA2 ak kantite izozim nan diferan venen koulèv, ki gen ladan 18 venen cobra, 3 venen mamba, 5 venen sèpan, 16 venen koulèv ak 3 venen koulèv lanmè.An jeneral, aktivite PLA2 nan venen cobra a wo anpil, ak anpil izozim.Aktivite PLA2 ak izozim venen sèpan se mwayen.Aktivite PLA2 venen mamba ak venen rattlesnake trè ba oswa pa gen aktivite PLA2.Aktivite PLA2 nan venen koulèv lanmè a tou ba.
Nan dènye ane yo, li pa te rapòte ke PLA2 nan venen koulèv egziste nan fòm lan nan dimè aktif, tankou lès rhombophora rattlesnake (C. venen koulèv gen kalite a ak kalite P PLA2, tou de nan yo ki konpoze de de subunit idantik. , epi sèlman dimerase genyen
Aktivite.Shen et al.te pwopoze tou ke sèlman dimer PLA2 nan venen koulèv la se fòm aktif nan anzim la.Etid la nan estrikti espasyal tou pwouve ke PLA2 nan lwès diamondback rattlesnake egziste nan fòm lan nan dim.Konpoze piscivor
Gen de diferan PLA ^ Ei ak E2 nan venen koulèv, nan ki 仏 egziste nan fòm lan nan dimè, dimè a se aktif, ak monomè disyosye li yo inaktif.Lu Yinghua et al.(1980) plis etidye pwopriyete fizik ak chimik ak sinetik reyaksyon E. Jayanthi et al.(1989) izole yon PLA2 debaz (VRVPL-V) soti nan venen sèpan an.Pwa molekilè PLA2 monomè a se 10000, ki gen efè letal, antikoagulan ak èdèm.Anzim nan ka polymerize polymers ak diferan pwa molekilè anba kondisyon an nan PH 4.8, ak degre nan polimerizasyon ak pwa molekilè nan polymère ogmante ak ogmantasyon nan tanperati.Pwa molekilè polymère ki te pwodwi nan 96 ° C se 53 100, ak aktivite PLA2 polymère sa a ogmante pa de.
Tan pòs: 18-Nov-2022